1103 – Evaluación de los principios activos en el Vassluten vencido para evaluar la estabilidad del fármaco y su posible reutilización

Universidad de Iberoamérica

Tibás, San José de Costa Rica

Facultad de Farmacia

Trabajo de investigación para optar por grado de licenciatura en Farmacia.

Tema:

“Evaluación de los principios activos en el Vassluten vencido para evaluar la estabilidad del fármaco y su posible reutilización”

Estudiantes:

Alvarado Mora Katherine – Solórzano Fuentes Lucía

Tutores:

Calvo Pineda MSc. Marco – Rodríguez Yebra Dra. Lissette

Resumen

Los desechos farmacéuticos son aquellos medicamentos vencidos, que no han sido utilizados, o que fueron derramados y

contaminados. Según el reglamento de control ambiental del Ministerio de salud se debe hacer una disposición final de estos

medicamentos siendo desechados. El presente trabajo de investigación pretende evaluar la estabilidad de tabletas vencidas y

demostrar que trabajar con fármacos vencidos podría generar una economía extra a la CCSS, y lograr demostrar bajo varios estudios,

que se puede tener un margen terapéutico de un tiempo mayor para alcanzar su fecha de vencimiento, que se estipula para los

medicamentos adquiridos a esta institución. En este estudio, se escogen tabletas de Vassluten en presentación con Irbesartán

simple y en otra presentación combinada con Hidroclorotiazida después de su fecha de expiración y así se valoran en ambas su

estabilidad. Además se utilizó el patrón puro de cada compuesto para así comparar la presencia de cada principio activo en las

tabletas. Para lograr lo planteado se emplearon procedimientos como la extracción de cada principio activo, y así realizar los

estudios requeridos mediante las pruebas de cromatografía de capa fina y cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC).

Según los resultados obtenidos se observa la inexistencia de interacciones y posible estabilidad en ambas moléculas de los principios

activos extraídos, además con la comparación de la literatura existente, se evidencia que son necesarios más estudios para

establecer con mayor seguridad, la estabilidad real de los medicamentos vencidos y su posible reutilización; y así poder reducir el

impacto ambiental y económico que estos mismos desechos producen.

Palabras Claves: medicamentos vencidos, estabilidad, Vassluten, principio activo, extracción, reutilización.

Abstract

Pharmaceutical wastes are drugs that have expired, have not been used, or have been spilled and contaminated. According to the environmental control regulations of the Ministry of Health, a final disposition of these medicines must be made and disposed of. This research aims to evaluate the stability of expired tablets and to demonstrate that working with overdue drugs could generate an extra economy to the CCSS and to be able to demonstrate under several studies that a therapeutic margin of a longer time to reach its date of expiration, which is stipulated for the drugs purchased from this institution. In this study, Vassluten tablets are chosen in presentation with Irbesartan simple and in another presentation combined with Hydrochlorothiazide after its expiration date and thus are valued in both their stability. In addition, the pure pattern of each compound was used to compare the presence of each active ingredient in the tablets.In order to achieve this, procedures such as the extraction of each active ingredient were used to perform the studies required by thin-layer chromatography and high-performance liquid chromatography (HPLC) tests.According to the obtained results it is observed the non-existence of interactions and possible stability in both molecules of the extracted active principles, besides comparing the existing literature, it is evident that more studies are necessary to establish with greater certainty, the real stability of the medicines And their possible reuse; And thus be able to reduce the environmental and economic impact that these same wastes produce.

1

Introducción

La estabilidad de los productos farmacéuticos puede detallarse como la capacidad de una formulación específica, en un sistema de empaquetamiento determinado, para permanecer dentro de las descripciones y sus características físicas, químicas, fisicoquímicas, microbiológicas, terapéuticas y toxicológicas, cuando estas características cambian y sobrepasan y sobrepasan sus fechas de expiración, se

generan medicamentos vencidos o desechos medicamentosos.

Según la Ley General de Salud se entiende por medicamentos deteriorados, para los efectos legales y reglamentarios, aquel que por cualquier causa ha perdido o disminuido su seguridad, potencia o pureza. Se presume de pleno derecho el deterioro, en aquellos medicamentos que se comercien, distribuyen y suministren vencidos el plazo de duración que señala su envase o envoltura. 1 Un mal manejo de los medicamentos vencidos expone la salud de las personas, el principal problema del vencimiento de dichos medicamentos es la compra masiva en medicamentos en cantidades enormes.

La hipertensión es una de las enfermedades crónicas más común en Costa Rica, representan alrededor del 8% del total de causas de consulta y dentro de éstas la hipertensión arterial ocupa el primer lugar y el 2,2% del total de egresos anuales en la CCSS. en el año 2012 se registraron 814 muertes por enfermedad hipertensiva, antes de los 40 años las defunciones son muy escasas, pero a partir de los 40 años se empiezan a elevar en forma exponencial. Debido esto se da un aumento mayor en el consumo de medicamentos antihipertensivos, lo que con lleva a uno de los principales problemas, el vencimiento de dichos medicamentos y exponiendo la salud de las personas por un mal manejo de los medicamentos vencidos.

El Irbesartán se ha convertido en uno de los medicamentos con mayor consumo en Costa Rica para el tratamiento de la hipertensión arterial, algunas personas no tienen adherencia al tratamiento por lo que generan un incumplimiento del mismo, provocando que el medicamento quede almacenado en condiciones no óptimas para el mismo generando que su efecto terapéutico disminuya o incluso el vencimiento del mismo, por lo tanto, en este proyecto de investigación se pretende, comprobar la posibilidad de recuperar el principio activo de los medicamentos vencidos para lograr reutilizarlos con fines terapéuticos. 2

Propiedades físicas y químicas de Irbesartán y la Hidroclorotiazida

Irbesartán

Nombre químico:

2-butil-3-[p-(o-1h-tetrazol-5-ilfenil)benzil]-1,3 diazaspiro[4.4]non-1-3n-4-ona. 19

Estructura química:

Formula molecular:

��25286

Peso molecular:

428,53 ������

Propiedades físicas: Polvo cristalino blanco o casi blanco.

Prácticamente insoluble en agua; poco soluble en etanol y en

cloruro de metilo16

2

Hidroclorotiazida

Nombre químico:

2H-1,2,4-benzotiadiazina-7-sulfonamida,6-cloro-3,4-dihidro-

,1,1-dióxido. 19

Estructura química:

Formula Molecular:

��78����34��2

Peso molecular:

297,74 ������

Propiedades físicas: polvo cristalino blanco o casi blanco.

Muy poco soluble en agua; bastante soluble en etanol; soluble en acetona. Se disuelve en soluciones diluidas de hidróxidos alcalinos16.

Procedimiento metodológico químico

Tipo de estudio

Esta investigación es de tipo analítica experimental, se basa en la extracción de los principios activos de Irbesartán y el de Irbesartán con Hidroclorotiazida ambas presentaciones expiradas, además de eso también se trató de observar la estabilidad de ambos compuestos para observar en qué condiciones se encuentran, y así, en determinado caso reutilizarlas para una nueva formulación. Asimismo observar si la combinación de ambos principios activos presenta alguna interacción después de su fecha de vencimiento.

Se usaron distintos métodos de separación para aislar el principio activo, además de esto también se realizó pruebas en HPLC como método cualitativo para analizar la estructura de las sustancias para determinar su identidad y estabilidad.

Descripción de pruebas

Para el desarrollo de esta parte química se utilizó como parámetro de comparación el antihipertensivo Vassluten que contiene Irbesartán 150mg, además también se utilizó Vassluten con Irbesartán 150mg mas Hidroclorotiazida 12.5mg ambas presentaciones en condiciones de expiración,

yse compara cada principio activo con el patrón puro de cada uno.

Se pretende mostrar igualdades y diferencias si es que existieran entre los fármacos y el patrón, mediantes las pruebas de laboratorio respectivas donde se evaluaron parámetros de estabilidad para comprobar su calidad y posibilidad de reutilizarlos en determinado momento en una nueva formulación.

Para la obtención de estos resultados se realizaron las siguientes pruebas:

La cromatografía de líquidos es la técnica analítica de separación más ampliamente utilizada. Se pueden desarrollar separaciones basadas en características tan diversas como la polaridad de los solutos, su naturaleza iónica, su peso molecular, su capacidad de partición o su capacidad de para formar complejos de afinidad.

Cromatografía de capa fina (TLC): Es considerada como una forma de cromatografía en la que la fase estacionaria es una capa fina sobre la superficie de una placa adecuada. La fase móvil es transportada sobre la superficie por acción capilar. Las ventajas de seguir este procedimiento son la velocidad y el bajo costo de los experimentos de exploración de capa fina.

3

Cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC): Es un tipo de cromatografía en columna utilizada frecuentemente en bioquímica y química analítica. Esta prueba se caracteriza por su gran sensibilidad, su fácil adaptación a las determinaciones cuantitativas y cualitativas exactas, su capacidad para la separación de especies no volátiles o termolábiles. En cromatografía liquido-liquido, la fase móvil es un líquido que fluye a trasvés de la columna que contiene la fase estacionaria.

La cromatografía liquida se usa en la actualidad para referirse a los métodos en los cuales la separación se produce dentro de na columna empaquetada. El material de empaque es la fase estacionaria y puede ser un sólido con capacidades adsorbidas o de exclusivo o un soporte inerte revestido con una fase liquida. Se usa una fase liquida móvil como eluyente. Aunque las cromatografías en capa delgada y en papel utilizan una fase móvil líquida y una fase estacionaria sólida, difieren en que las separaciones tienen lugar en una superficie plana en vez de en una columna 17.

El procedimiento en el cual se fuerza la fase móvil a través de la columna empaquetada bajo alta presión. Este método se denomina cromatografía liquida de alto rendimiento (HPLC) debido a que se obtienen eficiencias extremadamente altas ( tanto como 50.000 platos/m) o cromatografía liquida de alta presión, debido a las altas presiones requeridas (1.000 a 3.000 psi). En la HPLC, el diámetro típico de partícula es de 10 μm o menos y como resultado, las columnas son empaquetadas de manera más ajustada y desarrollan altas retropresiones que necesitan bombear la fase móvil a través de la columna.

La cromatografía de reparto se puede subdividir en cromatografía líquido – líquido y cromatografía con fases ligadas químicamente (enlazadas). La diferencia entre estas técnicas radica en la forma como se retiene la fase estacionaria sobre las partículas soporté de relleno.

Procedimientos experimentales

Procesos realizados para la realización de las diferentes pruebas:

Proceso 1, Extracción

La preparación de las muestras de las tres muestras fue la misma, con el fin de estandarizar el método de preparación de las mismas.

La finalidad de la extracción es la de separar el principio activo de los excipientes, utilizando etanol o metanol, aprovechando que los principios activos son solubles en dichas sustancias y sea posible su extracción.

1.Moler los comprimidos en un mortero :

Vassluten:

Irbesartán 150 mg

Irbesartán e hidroclorotiazida 1 50mg y 12.5 mg respectivamente

2.Disolver en 30 ml de etanol o metanol las tabletas maceradas tomando en cuenta la solubilidad de los principios activos.

3.Se utiliza papel de filtro y un embudo para separar los excipientes del principio activo disuelto.

4

Proceso 2, Cromatografía de capa fina

Una vez extraídos los principios activos, se procede a realizar las pruebas de cromatografía en capa fina, utilizando dos fases móviles, la primera se realizó en una proporción 1:1

donde se adicionó 5 ml de acetato de etilo y 5 ml de hexano; la segunda pase móvil presentaba una proporción 4:1:1 utilizando 12 ml de 1-butanol, 3 ml de ácido acético y 3 ml de agua destilada

Preparación 2.1:

1.Se trazaron dos líneas a 1 cm del extremo superior e inferior de la placa, se utilizaron 2 placas.

2.Se colocaron 1 muestra de cada principio activo (irbesartán, hidroclorotiazida, irbesartán con hidroclorotiazida) y sus respectivos patrones, utilizando un capilar.

3.Se colocó cada placa en un beaker de 1000 ml, donde cada beaker contenía 1 de las fases móviles que se mencionó anteriormente y se procedió a cerrarlas con papel aluminio para evitar pérdidas del vapor de las fases móviles.

4.Empieza la elución y se retira la placa cuando la fase móvil se aproxime a la línea trazada en extremo superior.

5.Una vez retirada cada placa del recipiente de elución se usó una lámpara UV como agente revelador de algún compuesto activo en la UV.

6.Seguidamente se sometió cada placa a vapor de Yodo como revelador de instauraciones.

Proceso 3, HPLC

Se realizó el análisis del contenido de Vassluten por cromatografía Líquida de Alta Eficacia (HPLC). utilizando los patrones correspondientes de cada principio activo, con el fin de demostrar cualitativamente la presencia de los principios activos extraídos de las tabletas de Vassluten y poder comparar los tiempos de retención de cada una de las 6 muestras, para lograr mayor rango de certeza de los resultados adquiridos.

Preparación 3.1:

1.La preparación de las muestras se inició tomando 300 mg del Vassluten con Irbesartán y en combinación con hidroclorotiazida.

2.Posteriormente, se pesan las tabletas, se llevaron a polvo fino y se les extraen los principios activos utilizando etanol.

3.Luego se les agregan a un balón volumétrico de 100

ml, a este se le adicionaron 40 ml de etanol y con este mismo se afora después de mezclar bien y

sonicar por 20 minutos.

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Análisis e interpretación de resultados

A continuación se presentan los resultados de cada cromatografía de capa fina (CCF) realizada.

Se aplicó una CCF para cada compuesto de forma independiente, y también en conjunto para analizar el transporte de cada una.

CCF#1

Fuente Propia

Imagen 1. Cromatografía CF de la primera extracción de Irbesartan tabletas. Fase móvil: Butanol, Ácido acético y agua.(4:1:1)

Se observa el desplazamiento de un solo punto, el cual corresponde a la molécula del Irbesartán.

CCF#2

Fuente Propia

Imagen 2. Cromatografía CF de la primera extracción de Irbesartan tabletas. Fase móvil: Acetato de etilo y hexano. (1:1)

Se logra observar un solo punto, que corresponde a la molécula del Irbesartán.

CFF#3

Fuente Propia

Imagen 3. Cromatografía CF de la primera extracción de Hidroclorotiazida tabletas. Fase móvil: Butanol, Ácido acético y agua.(4:1:1)

Se observa el desplazamiento de un solo punto, el cual corresponde a la molécula de Hidroclorotiazida.

CCF#4

Tabletas

Patrón

Fuente Propia

Imagen 4. Cromatografía CF de la primera extracción de Hidroclorotiazida tabletas. Fase móvil: Acetato de etilo y hexano. (1:1)

Se observa en cada una de las placas cromatografícas el desplazamiento de un solo punto, que corresponde al compuesto de Irbesartán con Hidroclorotiazida.

6

CCF#5

Fuente propia

Imagen 5. Cromatografía CF de la primera extracción de Hidroclorotiazida tabletas. Fase móvil: Acetato de etilo y hexano. (1:1)

Se observa un solo punto, que corresponde a la molécula de Hidroclorotiazida.

CCF#6

Fuente propia

Imagen 1. Cromatografía CF de la primera extracción de Irbesartan e Hidroclorotiazida. Fase móvil: Acetato de etilo y hexano. (1:1)

Se observa en la cromatografía de CF diferentes puntos que indican la presencia de los siguientes principios activos:

A:Hidroclorotiazida extraído Ap: Patrón hidroclorotiazida

B:Irbesartán extraído

Bp: patrón Irbesartán

C:Irbesartán mas Hidroclorotiazida extraído en reacción con reflujo

Cp: patrón Irbesartán con Hidroclorotiazida

CCF#7

Fuente propia

Imagen 7. Cromatografía de la segunda extracción de Irbesartan e Hidroclorotiazida. En vapor con Yodo.

Se puede observar que se da una buena separación

CCF#8

Fuente propia

Imagen 8. Cromatografía de la segunda extracción de Irbesartan e Hidroclorotiazida. Fase móvil: Butanol, Ácido acético y agua.

Se logra obserbar una mejor separación con una distancia reccorida muy alta.

CCF#9

Fuente propia

Imagen 9. Cromatografía de la primera extracción de Irbesartan e Hidroclorotiazida. En vapor con Yodo.

7

CCF#10

I: Irbesartán patrón.

H: Hidroclorotiazida patrón.

I + H: Irbesartán con Hidroclorotiazida patrón en reacción con reflujo.

Fuente propia

Imagen 10. Cromatografía de CF de la tercera extracción de Irbesartan e Hidroclorotiazida patrón. Fase móvil: Acetato de etilo y hexano. (1:1)

Se observa diferentes puntos, los cuales corresponden a la presencia de Irbesartán, Hidroclorotiazida y la combinación de ambos, logrando ver una separación entre uno y otro.

CCF#11

Fuente Propia

Imagen 11. Cromatografía de CF de Irbesartán e Hidroclorotiazida patrón. En vapor con Yodo.

CCF#12

Fuente propia

Imagen 12. Cromatografía de CF de Irbesartán e Hidroclorotiazida patrón. Fase móvil: Butanol, Ácido acético y agua.

Se observa una mejor separación de los diferentes puntos, que corresponden a la molécula de Irbesartán, Hidroclorotiazida y la combinación de ambos. También permite observar una mejor separación entre uno y otro.

CCF#13

Fuente propia

Imagen 13. Cromatografía de CF de Irbesartán e Hidroclorotiazida patrón. Fase móvil: Butanol, Ácido acético y agua. En vapor con Yodo.

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Pruebas con HPLC

Primer prueba

Patrón de Irbesartán

Fuente: Laboratorio Instrumental de la UNIBE.

Condiciones del HPLC:

Columna: C18

Buffer: 3��4 al 0.55% con pH 3.0

Flujo: 1.2 ml/min

Informe de Análisis:

Tiempo de retención: 9.404min

Área: 2406866.20

Presencia del punto de retención de la molécula de Irbesartán puro.

Muestra de Irbesartán extraído en tabletas

Fuente: Laboratorio Instrumental de la UNIBE.

Condiciones del HPLC:

Columna: C18

Buffer: 3��4 al 0.55% con pH 3.0

Flujo: 1.2 ml/min

Informe de Análisis

Tiempo de retención: 9.625min

Área: 13785835.99

Se denota la formación del pico que indica el tiempo de retención del Irbesartán extraído.

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Patrón Irbesartán e Hidroclorotiazida

Muestra de Irbesartán e hidroclorotiazida extraídos de

tabletas.

Fuente: Laboratorio Instrumental de la UNIBE.

Condiciones del HPLC:

Columna: C18

Buffer: 3��4 al 0.55% con pH 3.0

Flujo: 1.2 ml/min

Informe de análisis:

Tiempo de retención: 9.594min

Área: 8068914.19 μV-s

No se observa un pico definido para la hidroclorotiazida, pero si hay presencia del pico de Irbesartán puro.

Fuente: Laboratorio Instrumental de la UNIBE.

Condiciones del HPLC:

Columna: C18

Buffer: 3��4 al 0.55% con pH 3.0

Flujo: 1.2 ml/min

Información de análisis:

Tiempo de retención: 9.502min

Área: 53033157.73μV-s

No se observa un tiempo de retención para la hidroclorotiazida, pero si hay presencia del punto de retención de la molécula de Irbesartán extraído.

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Se forma una separación de ambos compuestos,

Separación parcial de Hidroclorotiazidaidentificando que no hay interacción entre ambos.

Se puede observar cómo se forma claramente el pico de Irbesartán, pero para el hidroclorotiazida no se forma un buen pico, esto puede ser por la columna que se utiliza que no está acorde a la molécula del hidroclorotiazida.

Analisis de la Hidroclorotiazida

……………………………….

Fuente: Laboratorio Instrumental de la UNIBE.

Condiciones del HPLC:

Columna: C18

Buffer: 3��4 al 0.55% con pH 3.0

Flujo: 1.2 ml/min

Información de análisis:

Fuente: Laboratorios Lisan

Tiempo de retención: Hidroclorotiazida: 3.199min Irbesartán: 4.044

Área:

Hidroclorotiazida: 7534347.26 μV-s

Irbesartán: 377859.53 μV-s

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Conclusiones

La extracción del Irbesartán simple y en conjunto con el Hidroclorotiazida en presentaciones vencidas es posible y aparte de eso se puede realizar un sistema de reacción a reflujo sin descomposición de cada compuesto.

Se puede concluir con las pruebas realizadas, que el Irbesartán con Hidroclorotiazida después de su fecha de expiración no presentan ninguna interacción alguna entre ellos.

Existe una gran variedad de análisis que permiten analizar la composición de una determinada molécula y poder valorar si el compuesto presenta cierta pureza y estabilidad, entre estos métodos de análisis están el HPLC, Cromatografías, análisis infrarrojo, resonancia magnética, entre otras.

Para las pruebas de HPLC no se logra observar adecuadamente la formación del pico para el hidroclorotiazida, esto posiblemente se deba a que la columna que se utiliza, no está acorde a la molécula del hidroclorotiazida generando dificultades para obtener mejores resultados de la misma.

El trabajar con fármacos vencidos podrían generar una alta economía; se alcanza a demostrar bajo varios estudios que se puede tener un margen terapéutico de tiempo mayor al que estipulan para los medicamentos.

Recomendaciones

Se recomienda tener más variedades de columnas para el HPLC para mejores resultados.

Sería necesario que la Universidad cuente con un HPLC acoplado a masas, para un mejor análisis de la molécula en estudio.

Contar con un equipo de resonancia magnética nuclear, es de gran utilidad para así conocer a ciencia cierta el tipo de molécula que se posee.

Realizar ensayos de estabilidad acelerada para medicamentos vencidos y determinar cuál es la vida útil real del principio activo.

Es importante seguir con este tipo de trabajos que generan un bajo costo para la universidad, generando un buen trabajo de investigación para los estudiantes con el apoyo de sus profesores, que cuentan con un excelente nivel académico.

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